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如何挑選合適的elisa試劑盒?
1、查找待測樣本的蛋白濃度
可以通過NCBI的文獻(xiàn),給出的蛋白表達(dá)量參考值來比較elisa試劑盒給出的樣本值與報(bào)道值是否一致。
2、試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測樣本的種類
除試劑盒特別說明外,一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有:血清和血漿(不同抗凝劑),細(xì)胞上清,和細(xì)胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用。
3、•.檢測范圍:
•建立線性范圍:需測定9-11個濃度水平,每個濃度水平重復(fù)測定3-4次。
•驗(yàn)證標(biāo)稱線性參數(shù):需測定4-6個濃度水平,每個濃度水平重復(fù)測定3-4次。
•所有樣本應(yīng)在一次運(yùn)行中或幾次間隔很短的運(yùn)行中隨機(jī)測定,最好在一天之內(nèi)完成。
4、試劑盒的其它指標(biāo)
a. 靈敏度:
•示例:人IL-13的低可檢測濃度為0.1 pg/ml(6 次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值)。10 個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩倍SD,計(jì)算低可檢測濃度。
•注意:靈敏度跟檢測范圍低點(diǎn)不相等。
b.•穩(wěn)定性(重復(fù)性、精密性)
•酶標(biāo)板內(nèi)精密度3 個已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定 20 次,評估酶標(biāo) 板內(nèi)的精密度。酶標(biāo)板間精密度 3 個已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測 6 次,評估酶標(biāo)板間的精密度。
•試劑盒一般板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% (統(tǒng)計(jì)學(xué)概念)