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SD 大鼠頸椎脫臼法處死,75%乙醇浸泡 1~2 分鐘,2 次,置超凈臺(tái)內(nèi),打開腹腔取出腎臟剪碎,置含 Hank's 液的無(wú)菌培養(yǎng)皿洗滌,置 80 目不銹鋼篩網(wǎng)上。
用扁平自制小鏟輕輕碾磨產(chǎn)物微小組織透過(guò)篩網(wǎng),濾過(guò)組織 Hank's 液混合物用吸管吸至120目不銹鋼篩網(wǎng),濾過(guò),去小組織塊,濾過(guò)物吸至200目不銹鋼篩網(wǎng),輕輕濾過(guò), Hank's液洗滌 次, 收集網(wǎng)上腎小球, 鏡下觀察為分離良好的腎小球。腎小球用 0.2%胰酶、0.1%膠原酶,37℃消化20 分鐘,加血清終止胰酶反應(yīng),離心除去膠原酶。處理過(guò)的腎小球計(jì)數(shù)后接種至24孔培養(yǎng)板或25ml培養(yǎng)瓶,使腎小球大于60個(gè)/cm2,加培養(yǎng)基5~10ml(培養(yǎng)基組成:F12—3T3 上清 1:1;5% 馬血清;2.5%胎牛血清;胰島素 5μg/ml;25ng/ml 氫化松;5μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白;25ng/ml 前列腺素 E1;甲狀腺素 0.02ng/ml;D-纈氨酸 150ng/ml)腎小球培養(yǎng) 8~10 天,去除腎小球未生長(zhǎng)組分,細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng) 24 小時(shí),形態(tài)學(xué)觀察:細(xì)胞生長(zhǎng)成單層多角型細(xì)胞,直徑約 100μm。